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簡要描述：MSU440電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞發(fā)根農(nóng)桿菌是根瘤菌科（Rhizobiaceae）農(nóng)桿菌屬（agrobacterium）的一種革蘭氏陰性土壤細(xì)菌，它能夠感染大多數(shù)雙子葉植物和少數(shù)單子葉植物以及個別裸子植物。MSU440發(fā)根農(nóng)桿菌菌株含有農(nóng)桿堿型Ri質(zhì)粒，具有廣泛的宿主范圍（玉米，煙草，茶樹，青蒿等），同時具有鏈霉素抗性。
更新時間：2022-01-21
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
瀏覽次數(shù)：596
| 品牌 | 其他品牌 | 貨號 | BFNC86114 |
|---|---|---|---|
| 規(guī)格 | 10x100ul/50x100ul | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
| 主要用途 | 僅用于科研 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
MSU440電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞
產(chǎn)品規(guī)格CAT#: BFNC86114-01(10×100ul)/BFNC86114-02(50×100ul)
MSU440 Electro： 50μl/支
pCAMBIA2301（control vector，10ng/μl )： 10μl
保存條件(保質(zhì)期)： -80℃（12個月）
基因型
Agrobacterium rhizogenes(strR ) MSU440 Ri (agropine type)
產(chǎn)品說明
發(fā)根農(nóng)桿菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農(nóng)桿菌屬(agrobacterium)的一種革蘭氏陰性土壤細(xì)菌，它能夠感染大多數(shù)雙子葉植物和少數(shù)單子葉植物以及個別裸子植物。MSU440發(fā)根農(nóng)桿菌菌株含有農(nóng)桿堿型Ri質(zhì)粒，具有廣泛的宿主范圍（玉米，煙草，茶樹，青蒿等），同時具有鏈霉素抗性。
青旗生物生產(chǎn)的 MSU440發(fā)根農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)特別適用于大質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化：經(jīng)pCAMBIA2301質(zhì)粒 (size:11633 bp)檢測轉(zhuǎn)化效率>105 cfu/μgDNA；經(jīng)pCAMBIA2301-ZH質(zhì)粒（size:40 kb）檢測轉(zhuǎn)化效率可達(dá)5×103 cfu/μg DNA。
常規(guī)操作方法
1. 0.1 cm電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘，待其瀝干水分，正置5分鐘，使乙醇充分揮發(fā)，待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中，壓實(shí)冰面，電極杯頂離冰面0.5 cm以方便蓋上杯蓋，冰中靜置5分鐘充分降溫。
2. 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)插入冰中5分鐘，待其融化，加入0.01-1 μg質(zhì)粒DNA（體積不大于6ul，盡量用試劑盒抽提，雙蒸水溶解；轉(zhuǎn)化效率較高，*使用前盡量做預(yù)實(shí)驗(yàn)確定所加質(zhì)粒的量），用手bo打管底混勻，立即插入冰中，用200 μl槍頭將感受態(tài)-質(zhì)粒混合物快速移到電擊杯中，蓋上杯蓋，空管保留待用。
3. 啟動電轉(zhuǎn)儀，設(shè)置參數(shù)：C=25 μF，PC=200 ohm，V=2400 V（此參數(shù)為Biorad 推薦，使用者也可按所用電轉(zhuǎn)儀推薦的protocol操作），將電擊杯從冰中拿出，吸水紙吸干外表面水份，快速放入電轉(zhuǎn)槽中，啟動電擊，電擊完成快速插入冰中，加入1 ml無抗生素的TY，并轉(zhuǎn)移到感受態(tài)空管中，28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時。
4. 6000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的平板上，倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)72小時
MSU440電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞
● 農(nóng)桿菌相關(guān)抗生素配方：
抗生素 | 配方 | 原液 | 工作液 |
羧芐青霉素 (carb) | 雙蒸水溶解，0.22 μm濾膜過濾除菌 | 50 mg/ml | 50 μg/ml |
硫酸卡那霉素 (kan) | 雙蒸水溶解，0.22 μm濾膜過濾除菌 | 50 mg/ml | 50 μg/ml |
鏈霉素 (strep) | 雙蒸水溶解，0.22 μm濾膜過濾除菌 | 10 mg/ml | 50 μg/ml |
利福平 (rif) | DMSO溶解，0.22 μm濾膜過濾除菌 | 10 mg/ml | 20 μg/ml |
慶大霉素 (gent) | 雙蒸水溶解，0.22 μm濾膜過濾除菌 | 20 mg/ml | 40 μg/ml |
氯霉素（cam） | 無水乙醇溶解，0.22 μm濾膜過濾除菌 | 34 mg/ml | 34 ug/ml |
常用農(nóng)桿菌抗性： (R：抗；S：敏感。)
農(nóng)桿菌菌株 | 羧芐青霉素(carb) | 鏈霉素(strep) | 利福平(rif) | 氯霉素(cam) | 硫酸卡那霉素(kan) |
Ar A4 | S | S | S | S | R |
MSU440 | S | R | S | S | S |
Ar Qual | S | R | S | R | S |
● TY配方（1L）：
Tryptone 5g
Yeast extract 3g
補(bǔ)水到1L體積，*溶解后，121度、20分鐘高溫滅菌
配制1M的氯化鈣水溶液，121度、20分鐘高溫滅菌
每1L 滅菌的TY液體營養(yǎng)液中加入10ml 無菌的1M氯化鈣水溶液即可。
若配制TY固體培養(yǎng)基，則加入15g 瓊脂粉。
注意事項(xiàng)
1. 加入質(zhì)粒時體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10；質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機(jī)物污染，轉(zhuǎn)化效率急劇下降；質(zhì)粒增大一倍，轉(zhuǎn)化效率下降一個數(shù)量級。
2. 電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞中不可混入氣泡，轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少終用于涂板的菌量。
3. 平板上陽性克隆密度過大時，由于營養(yǎng)不足，陽性克隆生長變慢，菌落變小，為了獲得大的菌落，應(yīng)減少質(zhì)粒用量或終用于涂板的菌量。
4. MSU440具有鏈霉素抗性，不可用于具有鏈霉素抗性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化。
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